背景介绍

918博天娱乐官网的裸露RNA作为带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的静电排斥作用，难以直接进入细胞，同时也易被环境中普遍存在的RNA酶迅速降解。因此，为了实现细胞内有效传递，RNA需要被保护性外壳包裹。细胞膜的主要成分是脂质，利用脂质囊泡将RNA封装，可有效穿透细胞膜并在细胞质中释放RNA。理想状态下，囊泡应为带正电的脂质以便与负电荷的RNA结合。然而，由于包含永久阳离子脂质的囊泡可能因与负电的细胞膜产生静电作用而引发细胞毒性，因此择用能对内体酸性环境做出响应的脂质结构是重要的。

脂质纳米粒结构

918博天娱乐官网的脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。LNP作为mRNA的传递系统，其作用机制包括多个步骤，确保mRNA能安全有效地运输到目标细胞并进行蛋白表达。在LNP中，可电离的阳离子脂质起到了重要的作用，它可以在自组装成LNP的过程中中和负电荷的RNA，并在中性pH下呈现无电状态以减少毒性，待细胞吸收后再带正电荷以促进内体逃逸。这一过程伴随内体pH的降低。胆固醇和PEG脂质的不同变体被证明能够调节LNP的物理性质与最终的传递效果。两性离子磷脂常被称为“辅助脂质”，而LNP在保护mRNA、促进细胞内传递以及激活免疫反应方面都发挥着关键作用。

LNP转染实验步骤

918博天娱乐官网的转染步骤以6孔板单孔为参考条件，其他培养形式请参考相应计划。

1. mRNA预混液制备：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物制备：混合625μL mRNA预混液与625μL easyLNP纳米混悬液，涡旋2-3秒以确保均匀。
3. 加入细胞：将125μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞中，轻轻晃动以使其均匀分散。
4. 分析时间：培养24-48小时后进行后续分析。

实验试剂推荐

918博天娱乐官网推荐以下转染试剂：

• 转染方式：mRNA转染试剂，货号：abs60339，规格：1mL
• easyLNP™ mRNA免疫细胞转染试剂盒，货号：mLabs60620，规格：15mL/3mL/5mL
• easyLNP™ Plus通用型RNA细胞转染试剂盒，货号：mLabs60621，规格：15mL/3mL/5mL
• Lipofect5000质粒转染试剂，货号：mLabs60322，规格：5mL/10mL

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